દર્દીના સીરમના ઉચ્ચ-રિઝોલ્યુશન માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રિક વિશ્લેષણનો ઉપયોગ કરીને ઉચ્ચ વિશિષ્ટતા સાથે સૌમ્ય અને જીવલેણ પલ્મોનરી નોડ્યુલ્સને અલગ પાડતા મેટાબોલોમિક્સ.

કમ્પ્યુટેડ ટોમોગ્રાફી (CT) દ્વારા ઓળખવામાં આવતા પલ્મોનરી નોડ્યુલ્સનું વિભેદક નિદાન ક્લિનિકલ પ્રેક્ટિસમાં એક પડકાર છે.અહીં, અમે તંદુરસ્ત નિયંત્રણો, સૌમ્ય ફેફસાના નોડ્યુલ્સ અને સ્ટેજ I લંગ એડેનોકાર્સિનોમા સહિત 480 સીરમ નમૂનાઓના વૈશ્વિક ચયાપચયને લાક્ષણિકતા આપીએ છીએ.એડેનોકાર્સિનોમા અનન્ય ચયાપચયની રૂપરેખાઓ દર્શાવે છે, જ્યારે સૌમ્ય નોડ્યુલ્સ અને તંદુરસ્ત વ્યક્તિઓમાં મેટાબોલિક પ્રોફાઇલ્સમાં ઉચ્ચ સમાનતા હોય છે.શોધ જૂથમાં (n = 306), સૌમ્ય અને જીવલેણ નોડ્યુલ્સ વચ્ચે તફાવત કરવા માટે 27 મેટાબોલાઇટ્સનો સમૂહ ઓળખવામાં આવ્યો હતો.આંતરિક માન્યતા (n = 104) અને બાહ્ય માન્યતા (n = 111) જૂથોમાં ભેદભાવના મોડેલનું AUC અનુક્રમે 0.915 અને 0.945 હતું.પાથવે વિશ્લેષણમાં સૌમ્ય નોડ્યુલ્સ અને સ્વસ્થ નિયંત્રણોની સરખામણીમાં ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમા સીરમમાં ટ્રિપ્ટોફન ઘટવા સાથે સંકળાયેલ ગ્લાયકોલિટીક ચયાપચયમાં વધારો થયો હોવાનું બહાર આવ્યું છે અને સૂચવ્યું છે કે ટ્રિપ્ટોફનનું સેવન ફેફસાના કેન્સરના કોષોમાં ગ્લાયકોલિસિસને પ્રોત્સાહન આપે છે.અમારો અભ્યાસ સીટી દ્વારા શોધાયેલ પલ્મોનરી નોડ્યુલ્સના જોખમનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે સીરમ મેટાબોલાઇટ બાયોમાર્કર્સના મૂલ્યને પ્રકાશિત કરે છે.
કેન્સરના દર્દીઓ માટે જીવન ટકાવી રાખવાના દરમાં સુધારો કરવા માટે પ્રારંભિક નિદાન મહત્વપૂર્ણ છે.યુએસ નેશનલ લંગ કેન્સર સ્ક્રીનીંગ ટ્રાયલ (NLST) અને યુરોપીયન નેલ્સન અભ્યાસના પરિણામો દર્શાવે છે કે લો-ડોઝ કોમ્પ્યુટેડ ટોમોગ્રાફી (LDCT) સાથેનું સ્ક્રીનીંગ ઉચ્ચ જોખમ ધરાવતા જૂથો 1,2,3માં ફેફસાના કેન્સરથી થતા મૃત્યુદરને નોંધપાત્ર રીતે ઘટાડી શકે છે.ફેફસાના કેન્સરની તપાસ માટે એલડીસીટીનો વ્યાપક ઉપયોગ થયો ત્યારથી, એસિમ્પટમેટિક પલ્મોનરી નોડ્યુલ્સના આકસ્મિક રેડિયોગ્રાફિક તારણો 4 વધતા ગયા છે.પલ્મોનરી નોડ્યુલ્સને 3 સેમી વ્યાસ 5 સુધીની ફોકલ અસ્પષ્ટતા તરીકે વ્યાખ્યાયિત કરવામાં આવે છે.જીવલેણતાની સંભાવનાનું મૂલ્યાંકન કરવામાં અને એલડીસીટી પર આકસ્મિક રીતે મળી આવેલા મોટી સંખ્યામાં પલ્મોનરી નોડ્યુલ્સ સાથે વ્યવહાર કરવામાં અમને મુશ્કેલીઓનો સામનો કરવો પડે છે.સીટીની મર્યાદાઓ વારંવાર ફોલો-અપ પરીક્ષાઓ અને ખોટા-સકારાત્મક પરિણામો તરફ દોરી શકે છે, જે બિનજરૂરી હસ્તક્ષેપ અને અતિશય સારવાર તરફ દોરી જાય છે.તેથી, પ્રારંભિક તબક્કામાં ફેફસાના કેન્સરને યોગ્ય રીતે ઓળખવા માટે વિશ્વસનીય અને ઉપયોગી બાયોમાર્કર્સ વિકસાવવાની જરૂર છે અને પ્રારંભિક તપાસ 7 પર મોટાભાગના સૌમ્ય નોડ્યુલ્સને અલગ પાડવાની જરૂર છે.
જીનોમિક્સ, પ્રોટીઓમિક્સ અથવા ડીએનએ મેથિલેશન8,9,10 સહિત રક્ત (સીરમ, પ્લાઝ્મા, પેરિફેરલ બ્લડ મોનોન્યુક્લિયર કોશિકાઓ)ના વ્યાપક પરમાણુ વિશ્લેષણને કારણે ફેફસાના કેન્સર માટે ડાયગ્નોસ્ટિક બાયોમાર્કર્સની શોધમાં રસ વધ્યો છે.દરમિયાન, મેટાબોલોમિક્સ અભિગમ સેલ્યુલર અંતિમ ઉત્પાદનોને માપે છે જે અંતર્જાત અને બાહ્ય ક્રિયાઓથી પ્રભાવિત છે અને તેથી રોગની શરૂઆત અને પરિણામની આગાહી કરવા માટે લાગુ કરવામાં આવે છે.લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી-ટેન્ડમ માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રી (LC-MS) તેની ઉચ્ચ સંવેદનશીલતા અને વિશાળ ગતિશીલ શ્રેણીને કારણે મેટાબોલિક્સ અભ્યાસ માટે વ્યાપકપણે ઉપયોગમાં લેવાતી પદ્ધતિ છે, જે વિવિધ ભૌતિક રાસાયણિક ગુણધર્મો સાથે મેટાબોલિટ્સને આવરી શકે છે11,12,13.ફેફસાના કેન્સર નિદાન14,15,16,17 અને સારવારની અસરકારકતા સાથે સંકળાયેલ બાયોમાર્કર્સને ઓળખવા માટે પ્લાઝ્મા/સીરમના વૈશ્વિક ચયાપચયના વિશ્લેષણનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હોવા છતાં, સૌમ્ય અને જીવલેણ ફેફસાના નોડ્યુલ્સ વચ્ચે તફાવત કરવા માટે 18 સીરમ મેટાબોલાઇટ વર્ગીકૃતોનો વધુ અભ્યાસ કરવાનું બાકી છે.- વિશાળ સંશોધન.
એડેનોકાર્સિનોમા અને સ્ક્વામસ સેલ કાર્સિનોમા એ નોન-સ્મોલ સેલ લંગ કેન્સર (NSCLC) ના બે મુખ્ય પેટા પ્રકારો છે.વિવિધ સીટી સ્ક્રીનીંગ પરીક્ષણો સૂચવે છે કે એડેનોકાર્સિનોમા એ ફેફસાના કેન્સરનો સૌથી સામાન્ય હિસ્ટોલોજિકલ પ્રકાર છે1,19,20,21.આ અભ્યાસમાં, અમે તંદુરસ્ત નિયંત્રણો, સૌમ્ય પલ્મોનરી નોડ્યુલ્સ અને સીટી-શોધાયેલ ≤3 સેમી સહિત કુલ 695 સીરમ નમૂનાઓ પર મેટાબોલિક્સ વિશ્લેષણ કરવા માટે અલ્ટ્રા-પર્ફોર્મન્સ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી-હાઈ-રિઝોલ્યુશન માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રી (UPLC-HRMS) નો ઉપયોગ કર્યો.સ્ટેજ I ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમા માટે સ્ક્રીનીંગ.અમે સીરમ ચયાપચયની એક પેનલ ઓળખી છે જે ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમાને સૌમ્ય નોડ્યુલ્સ અને તંદુરસ્ત નિયંત્રણોથી અલગ પાડે છે.પાથવે સંવર્ધન વિશ્લેષણ દર્શાવે છે કે અસામાન્ય ટ્રિપ્ટોફન અને ગ્લુકોઝ ચયાપચય એ સૌમ્ય નોડ્યુલ્સ અને તંદુરસ્ત નિયંત્રણોની તુલનામાં ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમામાં સામાન્ય ફેરફારો છે.અંતે, અમે એલડીસીટી દ્વારા શોધાયેલ જીવલેણ અને સૌમ્ય પલ્મોનરી નોડ્યુલ્સ વચ્ચે તફાવત કરવા માટે ઉચ્ચ વિશિષ્ટતા અને સંવેદનશીલતા સાથે સીરમ મેટાબોલિક ક્લાસિફાયરની સ્થાપના કરી અને માન્ય કર્યું, જે પ્રારંભિક વિભેદક નિદાન અને જોખમ મૂલ્યાંકનમાં મદદ કરી શકે છે.
વર્તમાન અભ્યાસમાં, 174 સ્વસ્થ નિયંત્રણો, સૌમ્ય પલ્મોનરી નોડ્યુલ્સવાળા 292 દર્દીઓ અને સ્ટેજ I ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમાવાળા 229 દર્દીઓમાંથી લિંગ- અને વય-મેળ ખાતા સીરમ નમૂનાઓ પૂર્વદર્શી રીતે એકત્રિત કરવામાં આવ્યા હતા.695 વિષયોની વસ્તી વિષયક લાક્ષણિકતાઓ પૂરક કોષ્ટક 1 માં દર્શાવવામાં આવી છે.
આકૃતિ 1a માં બતાવ્યા પ્રમાણે, સન યાટ-સેન યુનિવર્સિટી કેન્સર સેન્ટર ખાતે 174 હેલ્ધી કંટ્રોલ (HC), 170 સૌમ્ય નોડ્યુલ્સ (BN), અને 136 સ્ટેજ I લંગ એડેનોકાર્સિનોમા (LA) સેમ્પલ સહિત કુલ 480 સીરમ સેમ્પલ એકત્રિત કરવામાં આવ્યા હતા.અલ્ટ્રા-પર્ફોર્મન્સ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી-હાઇ-રિઝોલ્યુશન માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રી (UPLC-HRMS) નો ઉપયોગ કરીને અલક્ષિત મેટાબોલમિક પ્રોફાઇલિંગ માટે ડિસ્કવરી કોહોર્ટ.પૂરક આકૃતિ 1 માં બતાવ્યા પ્રમાણે, LA અને HC, LA અને BN વચ્ચેના વિભેદક ચયાપચયને વર્ગીકરણ મોડલ સ્થાપિત કરવા અને વિભેદક માર્ગ વિશ્લેષણનું વધુ અન્વેષણ કરવા માટે ઓળખવામાં આવ્યા હતા.સન યાટ-સેન યુનિવર્સિટી કેન્સર સેન્ટર દ્વારા એકત્રિત કરવામાં આવેલા 104 નમૂના અને અન્ય બે હોસ્પિટલો દ્વારા એકત્રિત કરવામાં આવેલા 111 નમૂના અનુક્રમે આંતરિક અને બાહ્ય માન્યતાને આધિન હતા.
અલ્ટ્રા-પર્ફોર્મન્સ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી-હાઇ-રિઝોલ્યુશન માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રી (UPLC-HRMS) નો ઉપયોગ કરીને વૈશ્વિક સીરમ મેટાબોલોમિક્સ વિશ્લેષણમાંથી પસાર થયેલા ડિસ્કવરી કોહોર્ટમાં અભ્યાસની વસ્તી.b અભ્યાસ સમૂહમાંથી 480 સીરમ નમૂનાઓના કુલ મેટાબોલોમનું આંશિક ઓછામાં ઓછું ચોરસ ભેદભાવ વિશ્લેષણ (PLS-DA), જેમાં તંદુરસ્ત નિયંત્રણો (HC, n = 174), સૌમ્ય નોડ્યુલ્સ (BN, n = 170), અને સ્ટેજ I લંગ એડેનોકાર્સિનોમાનો સમાવેશ થાય છે. (લોસ એન્જલસ, n = 136).+ESI, હકારાત્મક ઇલેક્ટ્રોસ્પ્રે આયનીકરણ મોડ, -ESI, નકારાત્મક ઇલેક્ટ્રોસ્પ્રે આયનીકરણ મોડ.આપેલ બે જૂથોમાં નોંધપાત્ર રીતે અલગ-અલગ વિપુલતાવાળા c–e મેટાબોલિટ્સ (ટુ-ટેલ્ડ વિલ્કોક્સન સાઇન કરેલ રેન્ક ટેસ્ટ, ખોટા શોધ દર એડજસ્ટેડ p મૂલ્ય, FDR <0.05) લાલ (ફોલ્ડ ચેન્જ > 1.2) અને વાદળી (ફોલ્ડ ચેન્જ <0.83) માં દર્શાવવામાં આવ્યા છે. .) જ્વાળામુખી ગ્રાફિક પર બતાવેલ છે.f હાયરાર્કિકલ ક્લસ્ટરીંગ હીટ મેપ LA અને BN વચ્ચેના ટીકાકૃત મેટાબોલાઇટ્સની સંખ્યામાં નોંધપાત્ર તફાવત દર્શાવે છે.સ્રોત ડેટા સ્રોત ડેટા ફાઇલોના સ્વરૂપમાં પ્રદાન કરવામાં આવે છે.
શોધ જૂથમાં 174 HC, 170 BN અને 136 LA ના કુલ સીરમ મેટાબોલોમનું UPLC-HRMS વિશ્લેષણનો ઉપયોગ કરીને વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું.અમે સૌપ્રથમ બતાવીએ છીએ કે ગુણવત્તા નિયંત્રણ (QC) નમૂનાઓ અસુપરવાઇઝ્ડ પ્રિન્સિપલ કમ્પોનન્ટ એનાલિસિસ (PCA) મોડેલના કેન્દ્રમાં ચુસ્તપણે ક્લસ્ટર છે, જે વર્તમાન અભ્યાસના પ્રદર્શનની સ્થિરતાની પુષ્ટિ કરે છે (પૂરક આકૃતિ 2).
આકૃતિ 1 b માં આંશિક લઘુત્તમ ચોરસ-ભેદભાવ વિશ્લેષણ (PLS-DA) માં બતાવ્યા પ્રમાણે, અમે જોયું કે LA અને BN, LA અને HC વચ્ચે હકારાત્મક (+ESI) અને નકારાત્મક (−ESI) ઈલેક્ટ્રોસ્પ્રે આયનીકરણ મોડમાં સ્પષ્ટ તફાવત છે. .અલગજો કે, +ESI અને -ESI પરિસ્થિતિઓમાં BN અને HC વચ્ચે કોઈ નોંધપાત્ર તફાવત જોવા મળ્યો નથી.
અમને LA અને HC વચ્ચે 382 વિભેદક વિશેષતાઓ, LA અને BN વચ્ચે 231 વિભેદક વિશેષતાઓ અને BN અને HC વચ્ચે 95 વિભેદક વિશેષતાઓ મળી છે (વિલકોક્સન સહી કરેલ રેન્ક ટેસ્ટ, FDR <0.05 અને બહુવિધ ફેરફાર >1.2 અથવા <0.83) (આકૃતિ .1c-e) )..M/z મૂલ્ય, રીટેન્શન ટાઇમ અને ફ્રેગમેન્ટેશન માસ સ્પેક્ટ્રમ શોધ (પદ્ધતિ વિભાગમાં વર્ણવેલ વિગતો) 22 દ્વારા ડેટાબેઝ (mzCloud/HMDB/Chemspider લાઇબ્રેરી) સામે શિખરોની વધુ ટીકા કરવામાં આવી હતી (પૂરક ડેટા 3).છેલ્લે, LA વિરુદ્ધ BN (આકૃતિ 1f અને પૂરક કોષ્ટક 2) અને LA વિરુદ્ધ HC (પૂરક આકૃતિ 3 અને પૂરક કોષ્ટક 2) માટે અનુક્રમે, વિપુલતામાં નોંધપાત્ર તફાવતો સાથે 33 અને 38 ટીકાયુક્ત ચયાપચયની ઓળખ કરવામાં આવી હતી.તેનાથી વિપરીત, PLS-DA માં BN અને HC વચ્ચેના ઓવરલેપ સાથે સુસંગત, BN અને HC (પૂરક કોષ્ટક 2) માં વિપુલતામાં નોંધપાત્ર તફાવતો સાથે માત્ર 3 ચયાપચયની ઓળખ કરવામાં આવી હતી.આ વિભેદક ચયાપચય બાયોકેમિકલ્સની વિશાળ શ્રેણીને આવરી લે છે (પૂરક આકૃતિ 4).એકસાથે લેવામાં આવે તો, આ પરિણામો સીરમ મેટાબોલોમમાં નોંધપાત્ર ફેરફારો દર્શાવે છે જે સૌમ્ય ફેફસાના નોડ્યુલ્સ અથવા તંદુરસ્ત વિષયોની તુલનામાં પ્રારંભિક તબક્કાના ફેફસાના કેન્સરના જીવલેણ પરિવર્તનને પ્રતિબિંબિત કરે છે.દરમિયાન, BN અને HC ના સીરમ મેટાબોલોમની સમાનતા સૂચવે છે કે સૌમ્ય પલ્મોનરી નોડ્યુલ્સ તંદુરસ્ત વ્યક્તિઓ સાથે ઘણી જૈવિક લાક્ષણિકતાઓ શેર કરી શકે છે.એપિડર્મલ ગ્રોથ ફેક્ટર રીસેપ્ટર (EGFR) જનીન પરિવર્તન ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમા પેટા પ્રકાર 23 માં સામાન્ય છે તે જોતાં, અમે સીરમ મેટાબોલોમ પર ડ્રાઇવર પરિવર્તનની અસર નક્કી કરવાનો પ્રયાસ કર્યો.અમે પછી ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમા જૂથમાં EGFR સ્થિતિ સાથે 72 કેસોની એકંદર મેટાબોલિક પ્રોફાઇલનું વિશ્લેષણ કર્યું.રસપ્રદ રીતે, અમને PCA વિશ્લેષણ (પૂરક આકૃતિ 5a) માં EGFR મ્યુટન્ટ દર્દીઓ (n = 41) અને EGFR જંગલી-પ્રકારના દર્દીઓ (n = 31) વચ્ચે તુલનાત્મક પ્રોફાઇલ્સ મળી.જો કે, અમે 7 ચયાપચયની ઓળખ કરી છે જેની વિપુલતા EGFR મ્યુટેશન ધરાવતા દર્દીઓમાં જંગલી પ્રકારના EGFR (t ટેસ્ટ, p < 0.05 અને ફોલ્ડ ચેન્જ > 1.2 અથવા < 0.83) (પૂરક આકૃતિ 5b) ધરાવતા દર્દીઓની સરખામણીમાં નોંધપાત્ર રીતે બદલાઈ હતી.આમાંના મોટાભાગના ચયાપચય (7માંથી 5) એસીલકાર્નેટીન છે, જે ફેટી એસિડ ઓક્સિડેશનના માર્ગમાં મહત્વપૂર્ણ ભૂમિકા ભજવે છે.
આકૃતિ 2 a માં બતાવેલ વર્કફ્લોમાં દર્શાવ્યા મુજબ, નોડ્યુલ વર્ગીકરણ માટે બાયોમાર્કર્સ ઓછામાં ઓછા સંપૂર્ણ સંકોચન ઓપરેટર્સનો ઉપયોગ કરીને મેળવવામાં આવ્યા હતા અને LA (n = 136) અને BN (n = 170) માં ઓળખાયેલ 33 વિભેદક ચયાપચયના આધારે પસંદગી કરવામાં આવી હતી.ચલોનું શ્રેષ્ઠ સંયોજન (LASSO) - બાઈનરી લોજિસ્ટિક રીગ્રેશન મોડલ.મોડેલની વિશ્વસનીયતા ચકાસવા માટે દસ-ગણો ક્રોસ-વેલિડેશનનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો.વેરિયેબલ સિલેક્શન અને પેરામીટર રેગ્યુલરાઇઝેશનને પેરામીટર λ24 સાથે શક્યતા મહત્તમ પેનલ્ટી દ્વારા એડજસ્ટ કરવામાં આવે છે.વૈશ્વિક ચયાપચયનું વિશ્લેષણ આગળ આંતરિક માન્યતા (n = 104) અને બાહ્ય માન્યતા (n = 111) જૂથોમાં ભેદભાવના મોડેલના વર્ગીકરણ પ્રદર્શનને ચકાસવા માટે સ્વતંત્ર રીતે કરવામાં આવ્યું હતું.પરિણામે, શોધ સમૂહમાં 27 ચયાપચયને સૌથી મોટા સરેરાશ AUC મૂલ્ય (ફિગ. 2b) સાથે શ્રેષ્ઠ ભેદભાવના મોડેલ તરીકે ઓળખવામાં આવ્યા હતા, જેમાંથી 9 એ BN (ફિગ. 2c) ની તુલનામાં LA માં પ્રવૃત્તિમાં વધારો કર્યો હતો અને 18 પ્રવૃત્તિમાં ઘટાડો કર્યો હતો.
પલ્મોનરી નોડ્યુલ ક્લાસિફાયર બનાવવા માટે વર્કફ્લો, જેમાં દસ-ગણા ક્રોસ-વેલિડેશન દ્વારા બાઈનરી લોજિસ્ટિક રીગ્રેશન મોડલનો ઉપયોગ કરીને ડિસ્કવરી સેટમાં સીરમ મેટાબોલિટ્સની શ્રેષ્ઠ પેનલ પસંદ કરવી અને આંતરિક અને બાહ્ય માન્યતા સેટમાં અનુમાનિત કામગીરીનું મૂલ્યાંકન કરવું.b મેટાબોલિક બાયોમાર્કર પસંદગી માટે LASSO રીગ્રેશન મોડેલના ક્રોસ-વેલિડેશન આંકડા.ઉપર આપેલ સંખ્યાઓ આપેલ λ પર પસંદ કરેલ બાયોમાર્કર્સની સરેરાશ સંખ્યા દર્શાવે છે.લાલ ડોટેડ રેખા અનુરૂપ લેમ્બડા પર સરેરાશ AUC મૂલ્ય દર્શાવે છે.ગ્રે એરર બાર ન્યૂનતમ અને મહત્તમ AUC મૂલ્યોનું પ્રતિનિધિત્વ કરે છે.ડોટેડ લાઇન 27 પસંદ કરેલા બાયોમાર્કર્સ સાથે શ્રેષ્ઠ મોડેલ સૂચવે છે.AUC, રીસીવર ઓપરેટિંગ લાક્ષણિકતા (ROC) વળાંક હેઠળનો વિસ્તાર.c શોધ જૂથમાં BN જૂથની સરખામણીમાં LA જૂથમાં 27 પસંદ કરેલા ચયાપચયના ફેરફારોને ફોલ્ડ કરો.લાલ કૉલમ - સક્રિયકરણ.વાદળી કૉલમ ઘટાડો છે.d–f રીસીવર ઓપરેટિંગ લાક્ષણિકતા (ROC) વક્ર શોધ, આંતરિક અને બાહ્ય માન્યતા સેટમાં 27 મેટાબોલિટ સંયોજનો પર આધારિત ભેદભાવપૂર્ણ મોડેલની શક્તિ દર્શાવે છે.સ્રોત ડેટા સ્રોત ડેટા ફાઇલોના સ્વરૂપમાં પ્રદાન કરવામાં આવે છે.
આ 27 ચયાપચય (પૂરક કોષ્ટક 3) ના ભારિત રીગ્રેશન ગુણાંકના આધારે એક આગાહી મોડેલ બનાવવામાં આવ્યું હતું.આ 27 ચયાપચયના આધારે આરઓસી વિશ્લેષણથી 0.933 ના વળાંક (AUC) મૂલ્ય હેઠળનો વિસ્તાર મળ્યો, શોધ જૂથની સંવેદનશીલતા 0.868 હતી, અને વિશિષ્ટતા 0.859 (ફિગ. 2d) હતી.દરમિયાન, LA અને HC વચ્ચેના 38 એનોટેટેડ વિભેદક ચયાપચયમાંથી, 16 ચયાપચયના સમૂહે 0.801 ની સંવેદનશીલતા સાથે 0.902 નું AUC અને HC (પૂરક આકૃતિ 6a-c) માંથી LA ભેદભાવમાં 0.856 ની વિશિષ્ટતા પ્રાપ્ત કરી.વિભેદક ચયાપચય માટે વિવિધ ફોલ્ડ ફેરફાર થ્રેશોલ્ડ પર આધારિત એયુસી મૂલ્યોની પણ સરખામણી કરવામાં આવી હતી.અમે જોયું કે વર્ગીકરણ મોડેલે LA અને BN (HC) વચ્ચે ભેદભાવ કરવામાં શ્રેષ્ઠ પ્રદર્શન કર્યું હતું જ્યારે ફોલ્ડ ચેન્જ લેવલ 1.2 વિરુદ્ધ 1.5 અથવા 2.0 પર સેટ કરવામાં આવ્યું હતું (પૂરક આકૃતિ 7a,b).27 મેટાબોલાઇટ જૂથો પર આધારિત વર્ગીકરણ મોડલ, આંતરિક અને બાહ્ય સમૂહોમાં વધુ માન્ય કરવામાં આવ્યું હતું.એયુસી આંતરિક માન્યતા માટે 0.915 (સંવેદનશીલતા 0.867, વિશિષ્ટતા 0.811) અને બાહ્ય માન્યતા માટે 0.945 (સંવેદનશીલતા 0.810, વિશિષ્ટતા 0.979) હતી (ફિગ. 2e, f).આંતરલેબોરેટરી કાર્યક્ષમતાનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે, પદ્ધતિઓ વિભાગમાં વર્ણવ્યા પ્રમાણે બાહ્ય સમૂહમાંથી 40 નમૂનાઓનું બાહ્ય પ્રયોગશાળામાં વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું.વર્ગીકરણની ચોકસાઈએ 0.925 (પૂરક આકૃતિ 8) નું AUC પ્રાપ્ત કર્યું.કારણ કે ફેફસાના સ્ક્વામસ સેલ કાર્સિનોમા (LUSC) એ ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમા (LUAD) પછી નોન-સ્મોલ સેલ લંગ કેન્સર (NSCLC) નો બીજો સૌથી સામાન્ય પેટા પ્રકાર છે, અમે મેટાબોલિક પ્રોફાઇલ્સની માન્ય સંભવિત ઉપયોગિતાનું પણ પરીક્ષણ કર્યું છે.BN અને LUSC ના 16 કેસ.LUSC અને BN વચ્ચેના ભેદભાવનું AUC 0.776 (પૂરક આકૃતિ 9) હતું, જે LUAD અને BN વચ્ચેના ભેદભાવની સરખામણીમાં નબળી ક્ષમતા દર્શાવે છે.
અભ્યાસોએ દર્શાવ્યું છે કે CT ઇમેજ પર નોડ્યુલ્સનું કદ જીવલેણતાની સંભાવના સાથે હકારાત્મક રીતે સંકળાયેલું છે અને નોડ્યુલ સારવાર 25,26,27નું મુખ્ય નિર્ણાયક રહે છે.NELSON સ્ક્રિનિંગ અભ્યાસના મોટા જૂથના ડેટાના પૃથ્થકરણે દર્શાવ્યું હતું કે <5 mm નોડ્સ ધરાવતા વિષયોમાં જીવલેણતાનું જોખમ ગાંઠો 28 વગરના વિષયોમાં સમાન હતું.તેથી, બ્રિટિશ થોરાસિક સોસાયટી (BTS) દ્વારા ભલામણ કર્યા મુજબ, નિયમિત CT મોનિટરિંગની આવશ્યકતા માટે લઘુત્તમ કદ 5 mm છે, અને Fleischner Society 29 ની ભલામણ મુજબ 6 mm છે.જો કે, 6 મીમી કરતા મોટા અને સ્પષ્ટ સૌમ્ય લક્ષણો વગરના નોડ્યુલ્સ, જેને અનિશ્ચિત પલ્મોનરી નોડ્યુલ્સ (IPN) કહેવાય છે, તે ક્લિનિકલ પ્રેક્ટિસ 30,31માં મૂલ્યાંકન અને સંચાલનમાં એક મોટો પડકાર રહે છે.અમે આગળ તપાસ કરી કે શું નોડ્યુલ કદ મેટાબોલિક હસ્તાક્ષરોને પ્રભાવિત કરે છે કે કેમ તે શોધ અને આંતરિક માન્યતા સમૂહમાંથી એકત્રિત નમૂનાઓનો ઉપયોગ કરીને.27 માન્ય બાયોમાર્કર્સ પર ધ્યાન કેન્દ્રિત કરીને, અમે પહેલા HC અને BN સબ-6 mm મેટાબોલોમની PCA પ્રોફાઇલ્સની સરખામણી કરી.અમને જાણવા મળ્યું છે કે HC અને BN માટે મોટાભાગના ડેટા પોઈન્ટ ઓવરલેપ થયા છે, જે દર્શાવે છે કે સીરમ મેટાબોલાઇટ સ્તર બંને જૂથોમાં સમાન હતા (ફિગ. 3a).BN અને LA (ફિગ. 3b, c) માં વિવિધ કદની રેન્જમાંના લક્ષણ નકશા સચવાયેલા રહ્યા, જ્યારે 6-20 mm શ્રેણીમાં જીવલેણ અને સૌમ્ય નોડ્યુલ્સ (ફિગ. 3d) વચ્ચે વિભાજન જોવા મળ્યું.આ સમૂહમાં 0.927 ની AUC, 0.868 ની વિશિષ્ટતા અને 0.820 ની સંવેદનશીલતા 6 થી 20 mm (ફિગ. 3e, f) માપવાના નોડ્યુલ્સની જીવલેણતાની આગાહી કરવા માટે હતી.અમારા પરિણામો દર્શાવે છે કે ક્લાસિફાયર નોડ્યુલના કદને ધ્યાનમાં લીધા વિના, પ્રારંભિક જીવલેણ પરિવર્તનને કારણે થતા મેટાબોલિક ફેરફારોને કેપ્ચર કરી શકે છે.
જાહેરાત 27 મેટાબોલિટ્સના મેટાબોલિક ક્લાસિફાયરના આધારે નિર્દિષ્ટ જૂથો વચ્ચે PCA પ્રોફાઇલ્સની સરખામણી.CC અને BN < 6 મીમી.b BN < 6 mm vs BN 6–20 mm.LA માં 6–20 mm વિરુદ્ધ LA 20–30 mm.g BN 6–20 mm અને LA 6–20 mm.જીસી, એન = 174;BN < 6 mm, n = 153;BN 6–20 mm, n = 91;LA 6–20 mm, n = 89;LA 20–30 mm, n = 77. e રીસીવર ઓપરેટિંગ લાક્ષણિકતા (ROC) વળાંક 6-20 mm નોડ્યુલ્સ માટે ભેદભાવપૂર્ણ મોડેલ પ્રદર્શન દર્શાવે છે.f સંભાવના મૂલ્યોની ગણતરી 6-20 મીમીના નોડ્યુલ્સ માટેના લોજિસ્ટિક રીગ્રેશન મોડલના આધારે કરવામાં આવી હતી.ગ્રે ડોટેડ લાઇન શ્રેષ્ઠ કટઓફ મૂલ્ય (0.455) દર્શાવે છે.ઉપરના આંકડા લોસ એન્જલસ માટે અંદાજિત કેસોની ટકાવારી દર્શાવે છે.બે પૂંછડીવાળા વિદ્યાર્થીની ટી ટેસ્ટનો ઉપયોગ કરો.પીસીએ, મુખ્ય ઘટક વિશ્લેષણ.વળાંક હેઠળ AUC વિસ્તાર.સ્રોત ડેટા સ્રોત ડેટા ફાઇલોના સ્વરૂપમાં પ્રદાન કરવામાં આવે છે.
સૂચિત જીવલેણ આગાહી મોડેલ (ફિગ. 4a, b) ની કામગીરીને દર્શાવવા માટે સમાન પલ્મોનરી નોડ્યુલ કદ (7-9 મીમી) સાથે ચાર નમૂનાઓ (44-61 વર્ષની વયના) વધુ પસંદ કરવામાં આવ્યા હતા.પ્રારંભિક સ્ક્રિનિંગ પર, કેસ 1 કેલ્સિફિકેશન સાથે નક્કર નોડ્યુલ તરીકે રજૂ થયો, જે સૌમ્યતા સાથે સંકળાયેલ લક્ષણ છે, જ્યારે કેસ 2 સ્પષ્ટ સૌમ્ય લક્ષણો સાથે અનિશ્ચિત આંશિક રીતે નક્કર નોડ્યુલ તરીકે રજૂ કરે છે.ફોલો-અપ સીટી સ્કેનનાં ત્રણ રાઉન્ડ દર્શાવે છે કે આ કેસો 4-વર્ષના સમયગાળા દરમિયાન સ્થિર રહ્યા હતા અને તેથી સૌમ્ય નોડ્યુલ્સ (ફિગ. 4a) ગણવામાં આવ્યા હતા.સીરીયલ સીટી સ્કેનનાં ક્લિનિકલ મૂલ્યાંકનની સરખામણીમાં, વર્તમાન ક્લાસિફાયર મોડલ સાથે સિંગલ-શોટ સીરમ મેટાબોલાઇટ પૃથ્થકરણે સંભવિત અવરોધોના આધારે આ સૌમ્ય નોડ્યુલ્સને ઝડપથી અને યોગ્ય રીતે ઓળખી કાઢ્યા (કોષ્ટક 1).આકૃતિ 4b કેસ 3 માં પ્લ્યુરલ રીટ્રેક્શનના ચિહ્નો સાથે નોડ્યુલ દર્શાવે છે, જે મોટેભાગે મેલીગ્નન્સી 32 સાથે સંકળાયેલ છે.કેસ 4 સૌમ્ય કારણના પુરાવા વિના અનિશ્ચિત આંશિક રીતે નક્કર નોડ્યુલ તરીકે રજૂ કરવામાં આવ્યો છે.ક્લાસિફાયર મોડલ (કોષ્ટક 1) અનુસાર આ તમામ કેસો જીવલેણ તરીકેની આગાહી કરવામાં આવી હતી.ફેફસાના રિસેક્શન સર્જરી (ફિગ. 4b) પછી હિસ્ટોપેથોલોજીકલ પરીક્ષા દ્વારા ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમાનું મૂલ્યાંકન દર્શાવવામાં આવ્યું હતું.બાહ્ય માન્યતા સમૂહ માટે, મેટાબોલિક ક્લાસિફાયર 6 મીમી (પૂરક આકૃતિ 10) કરતા મોટા અનિશ્ચિત ફેફસાના નોડ્યુલ્સના બે કેસોની ચોક્કસ આગાહી કરે છે.
સૌમ્ય નોડ્યુલ્સના બે કેસોના ફેફસાંની અક્ષીય વિંડોની સીટી છબીઓ.કેસ 1 માં, 4 વર્ષ પછી સીટી સ્કેન જમણા નીચલા લોબમાં કેલ્સિફિકેશન સાથે 7 મીમી માપવા માટે સ્થિર નક્કર નોડ્યુલ દર્શાવે છે.કેસ 2 માં, 5 વર્ષ પછી સીટી સ્કેનથી જમણા ઉપલા લોબમાં 7 મીમીના વ્યાસ સાથે સ્થિર, આંશિક રીતે નક્કર નોડ્યુલ જણાયું હતું.b ફેફસાંની અક્ષીય વિન્ડો સીટી છબીઓ અને ફેફસાંના રિસેક્શન પહેલાં સ્ટેજ I એડેનોકાર્સિનોમાના બે કેસોના અનુરૂપ પેથોલોજીકલ અભ્યાસ.કેસ 3 એ પ્લ્યુરલ રીટ્રેક્શન સાથે જમણા ઉપલા લોબમાં 8 મીમીના વ્યાસ સાથે નોડ્યુલ જાહેર કર્યું.કેસ 4 એ આંશિક રીતે નક્કર ગ્રાઉન્ડ-ગ્લાસ નોડ્યુલ દર્શાવ્યું હતું જે ડાબા ઉપલા લોબમાં 9 mm માપ્યું હતું.હેમેટોક્સિલિન અને ઇઓસિન (H&E) રિસેક્ટેડ ફેફસાના પેશીના સ્ટેનિંગ (સ્કેલ બાર = 50 μm) ફેફસાના એડિનોકાર્સિનોમાના એસિનર વૃદ્ધિ પેટર્નને દર્શાવે છે.તીરો CT ઈમેજો પર શોધાયેલ નોડ્યુલ્સ સૂચવે છે.H&E છબીઓ પેથોલોજીસ્ટ દ્વારા તપાસવામાં આવેલ બહુવિધ (>3) માઇક્રોસ્કોપિક ક્ષેત્રોની પ્રતિનિધિ છબીઓ છે.
સાથે મળીને, અમારા પરિણામો પલ્મોનરી નોડ્યુલ્સના વિભેદક નિદાનમાં સીરમ મેટાબોલાઇટ બાયોમાર્કર્સનું સંભવિત મૂલ્ય દર્શાવે છે, જે સીટી સ્ક્રીનીંગનું મૂલ્યાંકન કરતી વખતે પડકારો ઉભી કરી શકે છે.
માન્ય વિભેદક મેટાબોલાઇટ પેનલના આધારે, અમે મુખ્ય મેટાબોલિક ફેરફારોના જૈવિક સહસંબંધોને ઓળખવાનો પ્રયાસ કર્યો.MetaboAnalyst દ્વારા KEGG પાથવે સંવર્ધન પૃથ્થકરણે આપેલ બે જૂથો (LA vs. HC અને LA vs. BN, એડજસ્ટેડ p ≤ 0.001, અસર > 0.01) વચ્ચે 6 સામાન્ય નોંધપાત્ર રીતે બદલાયેલા માર્ગો ઓળખ્યા.આ ફેરફારો પાયરુવેટ ચયાપચય, ટ્રિપ્ટોફન ચયાપચય, નિયાસિન અને નિકોટિનામાઇડ ચયાપચય, ગ્લાયકોલિસિસ, ટીસીએ ચક્ર અને પ્યુરિન ચયાપચય (ફિગ. 5a) માં ખલેલ દ્વારા દર્શાવવામાં આવ્યા હતા.અમે પછી સંપૂર્ણ પરિમાણનો ઉપયોગ કરીને મોટા ફેરફારોને ચકાસવા માટે લક્ષિત ચયાપચયનું પ્રદર્શન કર્યું.અધિકૃત મેટાબોલાઇટ ધોરણોનો ઉપયોગ કરીને ટ્રિપલ ક્વાડ્રુપોલ માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રી (QQQ) દ્વારા સામાન્ય રીતે બદલાયેલા માર્ગોમાં સામાન્ય ચયાપચયનું નિર્ધારણ.મેટાબોલિક્સ અભ્યાસ લક્ષ્ય નમૂનાની વસ્તી વિષયક લાક્ષણિકતાઓ પૂરક કોષ્ટક 4 માં સમાવવામાં આવેલ છે. અમારા વૈશ્વિક ચયાપચયના પરિણામો સાથે સુસંગત, જથ્થાત્મક વિશ્લેષણએ પુષ્ટિ કરી છે કે બીએન અને એચસીની તુલનામાં LA માં હાયપોક્સેન્થિન અને xanthine, પાયરુવેટ અને લેક્ટેટમાં વધારો થયો હતો (ફિગ. p <0.05).જો કે, BN અને HC વચ્ચે આ ચયાપચયમાં કોઈ નોંધપાત્ર તફાવત જોવા મળ્યો નથી.
BN અને HC જૂથોની તુલનામાં LA જૂથમાં નોંધપાત્ર રીતે અલગ ચયાપચયની KEGG પાથવે સંવર્ધન વિશ્લેષણ.બે પૂંછડીવાળા ગ્લોબલટેસ્ટનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો, અને હોલ્મ-બોનફેરોની પદ્ધતિનો ઉપયોગ કરીને p મૂલ્યોને સમાયોજિત કરવામાં આવ્યા હતા (સમયોજિત p ≤ 0.001 અને અસરનું કદ > 0.01).LC-MS/MS (n = 70 પ્રતિ જૂથ) દ્વારા નિર્ધારિત સીરમ HC, BN, અને LA માં હાયપોક્સેન્થિન, ઝેન્થિન, લેક્ટેટ, પાયરુવેટ અને ટ્રિપ્ટોફન સ્તર દર્શાવતા b–d વાયોલિન પ્લોટ.સફેદ અને કાળી ડોટેડ રેખાઓ અનુક્રમે મધ્ય અને ચતુર્થાંશ દર્શાવે છે.e વાયોલિન પ્લોટ LUAD-TCGA ડેટાસેટમાં સામાન્ય ફેફસાના પેશીઓ (n = 59) ની સરખામણીમાં ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમા (n = 513) માં SLC7A5 અને QPRT ની સામાન્યકૃત Log2TPM (ટ્રાન્સક્રિપ્ટ્સ પ્રતિ મિલિયન) mRNA અભિવ્યક્તિ દર્શાવે છે.સફેદ બૉક્સ ઇન્ટરક્વાર્ટાઇલ રેન્જનું પ્રતિનિધિત્વ કરે છે, મધ્યમાં આડી કાળી રેખા મધ્યનું પ્રતિનિધિત્વ કરે છે, અને બૉક્સમાંથી વિસ્તરેલી ઊભી કાળી રેખા 95% આત્મવિશ્વાસ અંતરાલ (CI) રજૂ કરે છે.f TCGA ડેટાસેટમાં ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમા (n = 513) અને સામાન્ય ફેફસાના પેશીઓ (n = 59) માં SLC7A5 અને GAPDH અભિવ્યક્તિનો પીયર્સન સહસંબંધ પ્લોટ.ગ્રે વિસ્તાર 95% CI દર્શાવે છે.r, પીયર્સન સહસંબંધ ગુણાંક.g LC-MS/MS દ્વારા નિર્ધારિત બિન-વિશિષ્ટ shRNA કંટ્રોલ (NC) અને shSLC7A5 (Sh1, Sh2) વડે સ્થાનાંતરિત A549 કોષોમાં સામાન્ય સેલ્યુલર ટ્રિપ્ટોફન સ્તર.દરેક જૂથમાં પાંચ જૈવિક રીતે સ્વતંત્ર નમૂનાઓનું આંકડાકીય વિશ્લેષણ રજૂ કરવામાં આવ્યું છે.h A549 કોષો (NC) અને SLC7A5 નોકડાઉન A549 કોષો (Sh1, Sh2) માં NADt (કુલ NAD, NAD+ અને NADH સહિત) નું સેલ્યુલર સ્તર.દરેક જૂથમાં ત્રણ જૈવિક રીતે સ્વતંત્ર નમૂનાઓનું આંકડાકીય વિશ્લેષણ રજૂ કરવામાં આવ્યું છે.i SLC7A5 નોકડાઉન પહેલાં અને પછી A549 કોષોની ગ્લાયકોલિટીક પ્રવૃત્તિ એક્સ્ટ્રા સેલ્યુલર એસિડિફિકેશન રેટ (ECAR) (n = 4 જૂથ દીઠ જૈવિક રીતે સ્વતંત્ર નમૂનાઓ) દ્વારા માપવામાં આવી હતી.2-DG,2-deoxy-D-ગ્લુકોઝ.બે પૂંછડીવાળા વિદ્યાર્થીની ટી ટેસ્ટનો ઉપયોગ (b–h) માં થયો હતો.(g–i) માં, ભૂલ બાર સરેરાશ ± SD દર્શાવે છે, દરેક પ્રયોગ ત્રણ વખત સ્વતંત્ર રીતે કરવામાં આવ્યો હતો અને પરિણામો સમાન હતા.સ્રોત ડેટા સ્રોત ડેટા ફાઇલોના સ્વરૂપમાં પ્રદાન કરવામાં આવે છે.
LA જૂથમાં બદલાયેલ ટ્રિપ્ટોફન ચયાપચયની નોંધપાત્ર અસરને ધ્યાનમાં લેતા, અમે QQQ નો ઉપયોગ કરીને HC, BN, અને LA જૂથોમાં સીરમ ટ્રિપ્ટોફન સ્તરોનું પણ મૂલ્યાંકન કર્યું.અમને જાણવા મળ્યું છે કે HC અથવા BN (p <0.001, આકૃતિ 5d) ની સરખામણીમાં LA માં સીરમ ટ્રિપ્ટોફન ઘટ્યું હતું, જે અગાઉના તારણો સાથે સુસંગત છે કે ફેફસાના કેન્સરવાળા દર્દીઓમાં પરિભ્રમણ ટ્રિપ્ટોફનનું સ્તર નિયંત્રણ જૂથ 33,34ના તંદુરસ્ત નિયંત્રણો કરતાં ઓછું છે. ,35.PET/CT ટ્રેસર 11C-methyl-L-tryptophan નો ઉપયોગ કરીને કરાયેલા અન્ય અભ્યાસમાં જાણવા મળ્યું છે કે ફેફસાના કેન્સરની પેશીઓમાં ટ્રિપ્ટોફન સિગ્નલ જાળવી રાખવાનો સમય સૌમ્ય જખમ અથવા સામાન્ય પેશીઓની સરખામણીમાં નોંધપાત્ર રીતે વધ્યો હતો.અમે અનુમાન કરીએ છીએ કે LA સીરમમાં ટ્રિપ્ટોફનમાં ઘટાડો ફેફસાના કેન્સર કોષો દ્વારા સક્રિય ટ્રિપ્ટોફન શોષણને પ્રતિબિંબિત કરી શકે છે.
તે પણ જાણીતું છે કે ટ્રિપ્ટોફન કેટાબોલિઝમના કાયનુરેનાઇન પાથવેનું અંતિમ ઉત્પાદન NAD+37,38 છે, જે ગ્લાયકોલિસિસમાં 1,3-બિસ્ફોસ્ફોગ્લિસેરેટ સાથે ગ્લાયસેરાલ્ડીહાઇડ-3-ફોસ્ફેટની પ્રતિક્રિયા માટે એક મહત્વપૂર્ણ સબસ્ટ્રેટ છે.જ્યારે અગાઉના અભ્યાસોએ રોગપ્રતિકારક નિયમનમાં ટ્રિપ્ટોફન કેટાબોલિઝમની ભૂમિકા પર ધ્યાન કેન્દ્રિત કર્યું હતું, ત્યારે અમે વર્તમાન અભ્યાસમાં જોવા મળેલા ટ્રિપ્ટોફન ડિસરેગ્યુલેશન અને ગ્લાયકોલિટીક માર્ગો વચ્ચેના આંતરપ્રક્રિયાને સ્પષ્ટ કરવાનો પ્રયાસ કર્યો હતો.સોલ્યુટ ટ્રાન્સપોર્ટર ફેમિલી 7 મેમ્બર 5 (SLC7A5) ટ્રિપ્ટોફન ટ્રાન્સપોર્ટર 43,44,45 તરીકે ઓળખાય છે.ક્વિનોલિનિક એસિડ ફોસ્ફોરીબોસિલટ્રાન્સફેરેઝ (QPRT) એ એક એન્ઝાઇમ છે જે કાઇનુરેનાઇન પાથવેની નીચે સ્થિત છે જે ક્વિનોલિનિક એસિડને NAMN46 માં રૂપાંતરિત કરે છે.LUAD TCGA ડેટાસેટના નિરીક્ષણમાં જાણવા મળ્યું કે SLC7A5 અને QPRT બંને સામાન્ય પેશીઓ (ફિગ. 5e) ની તુલનામાં ગાંઠની પેશીઓમાં નોંધપાત્ર રીતે અપરેગ્યુલેટેડ હતા.આ વધારો તબક્કા I અને II તેમજ ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમા (પૂરક આકૃતિ 11) ના તબક્કા III અને IV માં જોવા મળ્યો હતો, જે ટ્યુમોરીજેનેસિસ સાથે સંકળાયેલ ટ્રિપ્ટોફન ચયાપચયમાં પ્રારંભિક વિક્ષેપ દર્શાવે છે.
વધુમાં, LUAD-TCGA ડેટાસેટ કેન્સરના દર્દીના નમૂનાઓમાં SLC7A5 અને GAPDH mRNA અભિવ્યક્તિ વચ્ચે સકારાત્મક સંબંધ દર્શાવે છે (r = 0.45, p = 1.55E-26, આકૃતિ 5f).તેનાથી વિપરીત, સામાન્ય ફેફસાના પેશીઓમાં આવા જનીન હસ્તાક્ષરો વચ્ચે કોઈ નોંધપાત્ર સહસંબંધ જોવા મળ્યો નથી (r = 0.25, p = 0.06, આકૃતિ 5f).A549 કોષોમાં SLC7A5 (પૂરક આકૃતિ 12) નું નોકડાઉન નોંધપાત્ર રીતે સેલ્યુલર ટ્રિપ્ટોફન અને NAD(H) સ્તર (આકૃતિ 5g,h) માં ઘટાડો કરે છે, પરિણામે એક્સ્ટ્રા સેલ્યુલર એસિડિફિકેશન રેટ (ECAR) (આકૃતિ 1) દ્વારા માપવામાં આવેલ એટેન્યુએટેડ ગ્લાયકોલિટીક પ્રવૃત્તિમાં પરિણમે છે.5i).આમ, સીરમમાં મેટાબોલિક ફેરફારો અને ઇન વિટ્રો ડિટેક્શનના આધારે, અમે અનુમાન કરીએ છીએ કે ટ્રિપ્ટોફન ચયાપચય કાઇનુરેનાઇન માર્ગ દ્વારા NAD+ ઉત્પન્ન કરી શકે છે અને ફેફસાના કેન્સરમાં ગ્લાયકોલિસિસને પ્રોત્સાહન આપવામાં મહત્વપૂર્ણ ભૂમિકા ભજવે છે.
અભ્યાસોએ દર્શાવ્યું છે કે LDCT દ્વારા શોધાયેલ મોટી સંખ્યામાં અનિશ્ચિત પલ્મોનરી નોડ્યુલ્સને કારણે PET-CT, ફેફસાની બાયોપ્સી, અને જીવલેણતાના ખોટા-પોઝિટિવ નિદાનને કારણે અતિશય સારવાર જેવા વધારાના પરીક્ષણની જરૂરિયાત ઊભી થઈ શકે છે. 31 આકૃતિ 6 માં બતાવ્યા પ્રમાણે, અમારા અભ્યાસમાં સંભવિત ડાયગ્નોસ્ટિક મૂલ્ય સાથે સીરમ મેટાબોલાઇટ્સની પેનલ ઓળખવામાં આવી છે જે સીટી દ્વારા શોધાયેલ પલ્મોનરી નોડ્યુલ્સના જોખમ સ્તરીકરણ અને અનુગામી વ્યવસ્થાપનને સુધારી શકે છે.
પલ્મોનરી નોડ્યુલ્સનું મૂલ્યાંકન લો-ડોઝ કોમ્પ્યુટેડ ટોમોગ્રાફી (LDCT) નો ઉપયોગ કરીને સૌમ્ય અથવા જીવલેણ કારણો સૂચવતી ઇમેજિંગ સુવિધાઓ સાથે કરવામાં આવે છે.નોડ્યુલ્સનું અનિશ્ચિત પરિણામ વારંવાર ફોલો-અપ મુલાકાતો, બિનજરૂરી દરમિયાનગીરીઓ અને અતિશય સારવાર તરફ દોરી શકે છે.ડાયગ્નોસ્ટિક મૂલ્ય સાથે સીરમ મેટાબોલિક ક્લાસિફાયરનો સમાવેશ જોખમ મૂલ્યાંકન અને પલ્મોનરી નોડ્યુલ્સના અનુગામી સંચાલનમાં સુધારો કરી શકે છે.PET પોઝિટ્રોન ઉત્સર્જન ટોમોગ્રાફી.
યુએસ NLST અભ્યાસ અને યુરોપીયન નેલ્સન અભ્યાસના ડેટા સૂચવે છે કે ઓછા-ડોઝ કોમ્પ્યુટેડ ટોમોગ્રાફી (LDCT) સાથે ઉચ્ચ જોખમ ધરાવતા જૂથોની તપાસ ફેફસાના કેન્સરથી મૃત્યુદર 1,3 ઘટાડી શકે છે.જો કે, એલડીસીટી દ્વારા શોધાયેલ મોટી સંખ્યામાં આકસ્મિક પલ્મોનરી નોડ્યુલ્સનું જોખમ મૂલ્યાંકન અને અનુગામી ક્લિનિકલ મેનેજમેન્ટ સૌથી પડકારજનક રહે છે.મુખ્ય ધ્યેય વિશ્વસનીય બાયોમાર્કર્સનો સમાવેશ કરીને હાલના LDCT-આધારિત પ્રોટોકોલના યોગ્ય વર્ગીકરણને ઑપ્ટિમાઇઝ કરવાનો છે.
અમુક મોલેક્યુલર બાયોમાર્કર્સ, જેમ કે રક્ત ચયાપચય, ફેફસાના કેન્સરની તંદુરસ્ત નિયંત્રણો સાથે સરખામણી કરીને ઓળખવામાં આવ્યા છે15,17.વર્તમાન અભ્યાસમાં, અમે LDCT દ્વારા આકસ્મિક રીતે શોધાયેલ સૌમ્ય અને જીવલેણ પલ્મોનરી નોડ્યુલ્સ વચ્ચે તફાવત કરવા માટે સીરમ મેટાબોલિક્સ વિશ્લેષણના ઉપયોગ પર ધ્યાન કેન્દ્રિત કર્યું છે.અમે UPLC-HRMS પૃથ્થકરણનો ઉપયોગ કરીને ગ્લોબલ સીરમ મેટાબોલોમ ઓફ હેલ્ધી કંટ્રોલ (HC), સૌમ્ય ફેફસાના નોડ્યુલ્સ (BN), અને સ્ટેજ I લંગ એડેનોકાર્સિનોમા (LA) સેમ્પલની સરખામણી કરી.અમે શોધી કાઢ્યું કે HC અને BN સમાન મેટાબોલિક પ્રોફાઇલ્સ ધરાવે છે, જ્યારે LA એ HC અને BN ની તુલનામાં નોંધપાત્ર ફેરફારો દર્શાવ્યા છે.અમે સીરમ ચયાપચયના બે સેટ ઓળખ્યા જે LA ને HC અને BN થી અલગ પાડે છે.
સૌમ્ય અને જીવલેણ નોડ્યુલ્સ માટે વર્તમાન એલડીસીટી-આધારિત ઓળખ યોજના મુખ્યત્વે સમય, 30 દરમિયાન નોડ્યુલ્સના કદ, ઘનતા, મોર્ફોલોજી અને વૃદ્ધિ દર પર આધારિત છે.અગાઉના અભ્યાસોએ દર્શાવ્યું છે કે નોડ્યુલ્સનું કદ ફેફસાના કેન્સરની સંભાવના સાથે નજીકથી સંબંધિત છે.ઉચ્ચ જોખમ ધરાવતા દર્દીઓમાં પણ, ગાંઠો <6 મીમીમાં જીવલેણતાનું જોખમ <1% છે.6 થી 20 મીમી સુધીના નોડ્યુલ્સ માટે જીવલેણતાનું જોખમ 8% થી 64%30 સુધીની છે.તેથી, ફ્લેસ્નર સોસાયટી નિયમિત સીટી ફોલો-અપ માટે 6 મીમીના કટઓફ વ્યાસની ભલામણ કરે છે.29 જો કે, 6 મીમી કરતા મોટા અનિશ્ચિત પલ્મોનરી નોડ્યુલ્સ (IPN) નું જોખમ મૂલ્યાંકન અને વ્યવસ્થાપન પર્યાપ્ત રીતે કરવામાં આવ્યું નથી 31.જન્મજાત હૃદય રોગનું વર્તમાન સંચાલન સામાન્ય રીતે વારંવાર સીટી મોનિટરિંગ સાથે સાવચેતીપૂર્વક રાહ જોવા પર આધારિત છે.
માન્ય મેટાબોલોમના આધારે, અમે પ્રથમ વખત તંદુરસ્ત વ્યક્તિઓ અને સૌમ્ય નોડ્યુલ્સ <6 મીમી વચ્ચે મેટાબોલિક હસ્તાક્ષરોનું ઓવરલેપ દર્શાવ્યું.જૈવિક સમાનતા અગાઉના CT તારણો સાથે સુસંગત છે કે નોડ્યુલ્સ <6 mm માટે જીવલેણતાનું જોખમ ગાંઠો વગરના વિષયો જેટલું ઓછું છે. 30 એ નોંધવું જોઈએ કે અમારા પરિણામો એ પણ દર્શાવે છે કે સૌમ્ય નોડ્યુલ્સ <6 mm અને ≥6 mm ઊંચા હોય છે. મેટાબોલિક રૂપરેખાઓમાં સમાનતા, સૂચવે છે કે સૌમ્ય ઇટીઓલોજીની કાર્યાત્મક વ્યાખ્યા નોડ્યુલના કદને ધ્યાનમાં લીધા વિના સુસંગત છે.આમ, આધુનિક ડાયગ્નોસ્ટિક સીરમ મેટાબોલાઇટ પેનલ્સ નિયમ-આઉટ ટેસ્ટ તરીકે એક જ પરીક્ષા પૂરી પાડી શકે છે જ્યારે નોડ્યુલ્સ શરૂઆતમાં CT પર મળી આવે છે અને સંભવિત રીતે સીરીયલ મોનિટરિંગ ઘટાડે છે.તે જ સમયે, મેટાબોલિક બાયોમાર્કર્સની સમાન પેનલે સૌમ્ય નોડ્યુલ્સમાંથી જીવલેણ નોડ્યુલ્સ ≥6 મીમીના કદને અલગ પાડ્યા હતા અને સમાન કદના IPN અને CT છબીઓ પર અસ્પષ્ટ મોર્ફોલોજિકલ લક્ષણો માટે સચોટ અનુમાનો પૂરા પાડ્યા હતા.આ સીરમ મેટાબોલિઝમ ક્લાસિફાયર 0.927 ની AUC સાથે નોડ્યુલ્સ ≥6 mm ની જીવલેણતાની આગાહી કરવામાં સારું પ્રદર્શન કર્યું.એકસાથે લેવામાં આવે તો, અમારા પરિણામો સૂચવે છે કે અનન્ય સીરમ મેટાબોલિક હસ્તાક્ષર ખાસ કરીને પ્રારંભિક ગાંઠ-પ્રેરિત મેટાબોલિક ફેરફારોને પ્રતિબિંબિત કરી શકે છે અને નોડ્યુલના કદથી સ્વતંત્ર, જોખમ આગાહીકર્તા તરીકે સંભવિત મૂલ્ય ધરાવે છે.
નોંધપાત્ર રીતે, ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમા (LUAD) અને સ્ક્વામસ સેલ કાર્સિનોમા (LUSC) નોન-સ્મોલ સેલ લંગ કેન્સર (NSCLC) ના મુખ્ય પ્રકારો છે.આપેલ છે કે LUSC એ તમાકુના ઉપયોગ સાથે મજબૂત રીતે સંકળાયેલું છે47 અને LUAD એ CT સ્ક્રીનીંગ 48 પર શોધાયેલ આકસ્મિક ફેફસાના નોડ્યુલ્સનું સૌથી સામાન્ય હિસ્ટોલોજી છે, અમારું વર્ગીકૃત મોડેલ ખાસ કરીને સ્ટેજ I એડેનોકાર્સિનોમા નમૂનાઓ માટે બનાવવામાં આવ્યું હતું.વાંગ અને સહકર્મીઓએ પણ LUAD પર ધ્યાન કેન્દ્રિત કર્યું અને તંદુરસ્ત વ્યક્તિઓમાંથી પ્રારંભિક તબક્કાના ફેફસાના કેન્સરને અલગ પાડવા માટે લિપિડોમિક્સનો ઉપયોગ કરીને નવ લિપિડ હસ્તાક્ષર ઓળખ્યા.અમે સ્ટેજ I LUSC અને 74 સૌમ્ય નોડ્યુલ્સના 16 કેસો પર વર્તમાન ક્લાસિફાયર મોડલનું પરીક્ષણ કર્યું અને ઓછી LUSC આગાહી ચોકસાઈ (AUC 0.776) અવલોકન કર્યું, જે સૂચવે છે કે LUAD અને LUSC પાસે તેમના પોતાના મેટાબોલમિક હસ્તાક્ષર હોઈ શકે છે.ખરેખર, LUAD અને LUSC એ ઈટીઓલોજી, જૈવિક મૂળ અને આનુવંશિક વિકૃતિઓ49માં અલગ હોવાનું દર્શાવવામાં આવ્યું છે.તેથી, સ્ક્રીનીંગ પ્રોગ્રામ્સમાં ફેફસાના કેન્સરની વસ્તી-આધારિત તપાસ માટે તાલીમ મોડેલોમાં અન્ય પ્રકારની હિસ્ટોલોજીનો સમાવેશ થવો જોઈએ.
અહીં, અમે તંદુરસ્ત નિયંત્રણો અને સૌમ્ય નોડ્યુલ્સની તુલનામાં ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમામાં છ સૌથી વધુ વારંવાર બદલાતા માર્ગો ઓળખ્યા.Xanthine અને hypoxanthine એ પ્યુરિન મેટાબોલિક પાથવેના સામાન્ય ચયાપચય છે.અમારા પરિણામો સાથે સુસંગત, પ્યુરિન ચયાપચય સાથે સંકળાયેલ મધ્યસ્થીઓ તંદુરસ્ત નિયંત્રણો અથવા પ્રિ-ઇનવેસિવ સ્ટેજ 15,50 પરના દર્દીઓની તુલનામાં ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમાવાળા દર્દીઓના સીરમ અથવા પેશીઓમાં નોંધપાત્ર રીતે વધ્યા હતા.એલિવેટેડ સીરમ xanthine અને hypoxanthine સ્તરો ઝડપથી કેન્સરના કોષોના પ્રસાર દ્વારા જરૂરી એનાબોલિઝમને પ્રતિબિંબિત કરી શકે છે.ગ્લુકોઝ મેટાબોલિઝમનું ડિસરેગ્યુલેશન એ કેન્સર મેટાબોલિઝમની જાણીતી ઓળખ છે51.અહીં, અમે HC અને BN જૂથની તુલનામાં LA જૂથમાં પાયરુવેટ અને લેક્ટેટમાં નોંધપાત્ર વધારો જોયો, જે નોન-સ્મોલ સેલ લંગ કેન્સર (NSCLC) દર્દીઓના સીરમ મેટાબોલોમ પ્રોફાઇલ્સમાં ગ્લાયકોલિટીક પાથવે અસાધારણતાના અગાઉના અહેવાલો સાથે સુસંગત છે અને સ્વસ્થ નિયંત્રણો.પરિણામો સુસંગત છે 52,53.
અગત્યની રીતે, અમે ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમાસના સીરમમાં પાયરુવેટ અને ટ્રિપ્ટોફન ચયાપચય વચ્ચેનો વ્યસ્ત સંબંધ જોયો.HC અથવા BN જૂથની સરખામણીમાં LA જૂથમાં સીરમ ટ્રિપ્ટોફનનું સ્તર ઘટ્યું હતું.રસપ્રદ વાત એ છે કે, સંભવિત સમૂહનો ઉપયોગ કરીને અગાઉના મોટા પાયે અભ્યાસમાં જાણવા મળ્યું છે કે ફરતા ટ્રિપ્ટોફનનું નીચું સ્તર ફેફસાના કેન્સરના વધતા જોખમ સાથે સંકળાયેલું છે 54.ટ્રિપ્ટોફન એ આવશ્યક એમિનો એસિડ છે જે આપણને સંપૂર્ણ રીતે ખોરાકમાંથી મળે છે.અમે તારણ કાઢીએ છીએ કે ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમામાં સીરમ ટ્રિપ્ટોફન અવક્ષય આ ચયાપચયના ઝડપી અવક્ષયને પ્રતિબિંબિત કરી શકે છે.તે જાણીતું છે કે ટ્રિપ્ટોફન અપચયનું અંતિમ ઉત્પાદન kynurenine પાથવે દ્વારા ડી નોવો NAD+ સંશ્લેષણનો સ્ત્રોત છે.કારણ કે એનએડી+ મુખ્યત્વે બચાવ માર્ગ દ્વારા ઉત્પન્ન થાય છે, આરોગ્ય અને રોગમાં ટ્રિપ્ટોફન ચયાપચયમાં NAD+ નું મહત્વ નક્કી કરવાનું બાકી છે46.TCGA ડેટાબેઝના અમારા વિશ્લેષણ દર્શાવે છે કે ટ્રિપ્ટોફન ટ્રાન્સપોર્ટર સોલ્યુટ ટ્રાન્સપોર્ટર 7A5 (SLC7A5) ની અભિવ્યક્તિ સામાન્ય નિયંત્રણોની તુલનામાં ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમામાં નોંધપાત્ર રીતે વધી હતી અને ગ્લાયકોલિટીક એન્ઝાઇમ GAPDH ની અભિવ્યક્તિ સાથે હકારાત્મક રીતે સંકળાયેલી હતી.અગાઉના અભ્યાસોએ મુખ્યત્વે 40,41,42 એન્ટિટ્યુમર પ્રતિકારક પ્રતિભાવને દબાવવામાં ટ્રિપ્ટોફન અપચયની ભૂમિકા પર ધ્યાન કેન્દ્રિત કર્યું હતું.અહીં અમે દર્શાવીએ છીએ કે ફેફસાના કેન્સરના કોષોમાં SLC7A5 ના નોકડાઉન દ્વારા ટ્રિપ્ટોફનનું સેવન અટકાવવાથી સેલ્યુલર NAD સ્તરમાં અનુગામી ઘટાડો થાય છે અને ગ્લાયકોલિટીક પ્રવૃત્તિના સહવર્તી એટેન્યુએશનમાં પરિણમે છે.સારાંશમાં, અમારો અભ્યાસ ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમાના જીવલેણ પરિવર્તન સાથે સંકળાયેલ સીરમ ચયાપચયમાં ફેરફારો માટે જૈવિક આધાર પૂરો પાડે છે.
NSCLC ધરાવતા દર્દીઓમાં EGFR મ્યુટેશન સૌથી સામાન્ય ડ્રાઈવર મ્યુટેશન છે.અમારા અભ્યાસમાં, અમે જોયું કે EGFR મ્યુટેશન (n = 41) ધરાવતા દર્દીઓમાં જંગલી-પ્રકારના EGFR (n = 31) ધરાવતા દર્દીઓની સમાન એકંદર મેટાબોલિક પ્રોફાઇલ્સ હતી, જો કે અમને એસિલકાર્નેટીન દર્દીઓમાં કેટલાક EGFR મ્યુટન્ટ દર્દીઓના સીરમ સ્તરમાં ઘટાડો જોવા મળ્યો હતો.એસિલકાર્નેટીન્સનું સ્થાપિત કાર્ય એસીલ જૂથોને સાયટોપ્લાઝમમાંથી માઇટોકોન્ડ્રીયલ મેટ્રિક્સમાં પરિવહન કરવાનું છે, જે ઊર્જા ઉત્પન્ન કરવા માટે ફેટી એસિડનું ઓક્સિડેશન તરફ દોરી જાય છે 55.અમારા તારણો સાથે સુસંગત, તાજેતરના અભ્યાસમાં 102 ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમા પેશીના નમૂનાઓનું વૈશ્વિક મેટાબોલોમ પૃથ્થકરણ કરીને EGFR મ્યુટન્ટ અને EGFR વાઇલ્ડ-પ્રકારની ગાંઠો વચ્ચે સમાન મેટાબોલોમ પ્રોફાઇલ્સ પણ ઓળખવામાં આવ્યા છે.રસપ્રદ વાત એ છે કે, EGFR મ્યુટન્ટ ગ્રૂપમાં પણ acylcarnitine સામગ્રી જોવા મળી હતી.તેથી, શું એસિલકાર્નેટીન સ્તરોમાં ફેરફારો EGFR-પ્રેરિત મેટાબોલિક ફેરફારોને પ્રતિબિંબિત કરે છે અને અંતર્ગત પરમાણુ માર્ગો વધુ અભ્યાસ માટે યોગ્ય હોઈ શકે છે.
નિષ્કર્ષમાં, અમારો અભ્યાસ પલ્મોનરી નોડ્યુલ્સના વિભેદક નિદાન માટે સીરમ મેટાબોલિક ક્લાસિફાયરની સ્થાપના કરે છે અને વર્કફ્લોની દરખાસ્ત કરે છે જે જોખમ મૂલ્યાંકનને ઑપ્ટિમાઇઝ કરી શકે છે અને સીટી સ્કેન સ્ક્રીનીંગના આધારે ક્લિનિકલ મેનેજમેન્ટને સરળ બનાવી શકે છે.
આ અભ્યાસને સન યાટ-સેન યુનિવર્સિટી કેન્સર હોસ્પિટલની એથિક્સ કમિટી, સન યાટ-સેન યુનિવર્સિટીની પ્રથમ સંલગ્ન હોસ્પિટલ અને ઝેંગઝૂ યુનિવર્સિટી કેન્સર હોસ્પિટલની એથિક્સ કમિટી દ્વારા મંજૂરી આપવામાં આવી હતી.શોધ અને આંતરિક માન્યતા જૂથોમાં, સ્વસ્થ વ્યક્તિઓમાંથી 174 સેરા અને સૌમ્ય નોડ્યુલ્સમાંથી 244 સેરા કેન્સર નિયંત્રણ અને નિવારણ વિભાગ, સન યાટ-સેન યુનિવર્સિટી કેન્સર સેન્ટર ખાતે વાર્ષિક તબીબી પરીક્ષાઓમાંથી પસાર થઈ રહેલા વ્યક્તિઓ પાસેથી અને 166 સૌમ્ય નોડ્યુલ્સ એકત્રિત કરવામાં આવ્યા હતા.સીરમસન યાટ-સેન યુનિવર્સિટી કેન્સર સેન્ટરમાંથી સ્ટેજ I ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમાસ એકત્રિત કરવામાં આવ્યા હતા.બાહ્ય માન્યતા સમૂહમાં, સૌમ્ય નોડ્યુલ્સના 48 કેસો, સન યાટ-સેન યુનિવર્સિટીની પ્રથમ સંલગ્ન હોસ્પિટલમાંથી સ્ટેજ I ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમાના 39 કેસો અને ઝેંગઝોઉ કેન્સર હોસ્પિટલના સ્ટેજ I ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમાના 24 કેસો હતા.સન યાટ-સેન યુનિવર્સિટી કેન્સર સેન્ટરે સ્થાપિત મેટાબોલિક ક્લાસિફાયરની ડાયગ્નોસ્ટિક ક્ષમતાને ચકાસવા માટે સ્ટેજ I સ્ક્વામસ સેલ ફેફસાના કેન્સરના 16 કેસ પણ એકત્રિત કર્યા (દર્દીની લાક્ષણિકતાઓ પૂરક કોષ્ટક 5 માં દર્શાવવામાં આવી છે).ડિસ્કવરી કોહોર્ટ અને આંતરિક માન્યતા સમૂહમાંથી નમૂનાઓ જાન્યુઆરી 2018 અને મે 2020 વચ્ચે એકત્રિત કરવામાં આવ્યા હતા. બાહ્ય માન્યતા સમૂહ માટેના નમૂનાઓ ઓગસ્ટ 2021 અને ઑક્ટોબર 2022 વચ્ચે એકત્રિત કરવામાં આવ્યા હતા. લિંગ પૂર્વગ્રહને ઘટાડવા માટે, પ્રત્યેક કેસમાં પુરૂષ અને સ્ત્રીની લગભગ સમાન સંખ્યા સોંપવામાં આવી હતી. સમૂહડિસ્કવરી ટીમ અને આંતરિક સમીક્ષા ટીમ.સ્વ-રિપોર્ટના આધારે સહભાગી લિંગ નક્કી કરવામાં આવ્યું હતું.તમામ સહભાગીઓ પાસેથી જાણકાર સંમતિ મેળવવામાં આવી હતી અને કોઈ વળતર આપવામાં આવ્યું ન હતું.સૌમ્ય નોડ્યુલ્સ ધરાવતા વિષયો એવા હતા કે જેમના વિશ્લેષણ સમયે 2 થી 5 વર્ષમાં સ્થિર સીટી સ્કેન સ્કોર હતો, બાહ્ય માન્યતા નમૂનામાંથી 1 કેસ સિવાય, જે ઓપરેશન પહેલા એકત્ર કરવામાં આવ્યું હતું અને હિસ્ટોપેથોલોજી દ્વારા નિદાન કરવામાં આવ્યું હતું.ક્રોનિક બ્રોન્કાઇટિસના અપવાદ સાથે.ફેફસાના રિસેક્શન પહેલા ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમાના કેસો એકત્રિત કરવામાં આવ્યા હતા અને પેથોલોજીકલ નિદાન દ્વારા પુષ્ટિ કરવામાં આવી હતી.ફાસ્ટિંગ બ્લડ સેમ્પલ સીરમ સેપરેશન ટ્યુબમાં કોઈપણ એન્ટિકોએગ્યુલન્ટ્સ વિના એકત્રિત કરવામાં આવ્યા હતા.લોહીના નમૂનાઓ ઓરડાના તાપમાને 1 કલાક માટે ગંઠાઈ ગયા હતા અને પછી સીરમ સુપરનેટન્ટ એકત્રિત કરવા માટે 4°C પર 10 મિનિટ માટે 2851 × g પર સેન્ટ્રીફ્યુઝ કરવામાં આવ્યા હતા.મેટાબોલાઇટ નિષ્કર્ષણ સુધી સીરમ એલિકોટ્સ -80 ° સે પર સ્થિર કરવામાં આવ્યા હતા.સન યાટ-સેન યુનિવર્સિટી કેન્સર સેન્ટરના કેન્સર નિવારણ અને તબીબી પરીક્ષા વિભાગે 100 તંદુરસ્ત દાતાઓ પાસેથી સીરમનો પૂલ એકત્રિત કર્યો, જેમાં 40 થી 55 વર્ષની વયના પુરૂષો અને સ્ત્રીઓની સમાન સંખ્યાનો સમાવેશ થાય છે.દરેક દાતાના નમૂનાની સમાન માત્રાને મિશ્ર કરવામાં આવી હતી, પરિણામી પૂલને અલગ કરવામાં આવ્યો હતો અને -80 ° સે પર સંગ્રહિત કરવામાં આવ્યો હતો.સીરમ મિશ્રણનો ઉપયોગ ગુણવત્તા નિયંત્રણ અને ડેટા માનકીકરણ માટે સંદર્ભ સામગ્રી તરીકે કરવામાં આવ્યો હતો.
સંદર્ભ સીરમ અને પરીક્ષણ નમૂનાઓ ઓગળવામાં આવ્યા હતા અને સંયુક્ત નિષ્કર્ષણ પદ્ધતિ (MTBE/મેથેનોલ/પાણી) 56 નો ઉપયોગ કરીને ચયાપચયને કાઢવામાં આવ્યા હતા.સંક્ષિપ્તમાં, 50 μl સીરમ 225 μl બરફ-ઠંડા મિથેનોલ અને 750 μl આઇસ-કોલ્ડ મિથાઈલ ટર્ટ-બ્યુટીલ ઈથર (MTBE) સાથે મિશ્રિત કરવામાં આવ્યું હતું.મિશ્રણને હલાવો અને 1 કલાક માટે બરફ પર પકાવો.પછી નમૂનાઓને મિશ્રિત કરવામાં આવ્યા હતા અને 188 μl MS-ગ્રેડના પાણીમાં આંતરિક ધોરણો (13C-lactate, 13C3-pyruvate, 13C-methionine, અને 13C6-isoleucine, કેમ્બ્રિજ આઇસોટોપ લેબોરેટરીઝમાંથી ખરીદેલ) સાથે મિશ્રિત કરવામાં આવ્યા હતા.ત્યારબાદ મિશ્રણને 4 °C તાપમાને 10 મિનિટ માટે 15,000 × g પર સેન્ટ્રીફ્યુજ કરવામાં આવ્યું હતું અને LC-MS પૃથ્થકરણ માટે સકારાત્મક અને નકારાત્મક સ્થિતિમાં નીચલા તબક્કાને બે ટ્યુબ (125 μL પ્રત્યેક) માં સ્થાનાંતરિત કરવામાં આવ્યું હતું.અંતે, હાઇ-સ્પીડ વેક્યુમ કોન્સેન્ટ્રેટરમાં નમૂનાને શુષ્કતા માટે બાષ્પીભવન કરવામાં આવ્યું હતું.
સૂકા ચયાપચયની 120 μl 80% એસેટોનાઇટ્રાઇલમાં પુનઃરચના કરવામાં આવી હતી, 5 મિનિટ માટે વમળમાં મૂકવામાં આવી હતી અને 4°C પર 10 મિનિટ માટે 15,000 × g પર સેન્ટ્રીફ્યુજ કરવામાં આવી હતી.ચયાપચયના અભ્યાસ માટે માઇક્રોઇન્સર્ટ સાથે સુપરનેટન્ટ્સને એમ્બર કાચની શીશીઓમાં સ્થાનાંતરિત કરવામાં આવ્યા હતા.અલ્ટ્રા-પર્ફોર્મન્સ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી-હાઇ-રિઝોલ્યુશન માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રી (UPLC-HRMS) પ્લેટફોર્મ પર અલક્ષિત મેટાબોલિક્સ વિશ્લેષણ.ડાયોનેક્સ અલ્ટીમેટ 3000 UPLC સિસ્ટમ અને ACQUITY BEH એમાઈડ કૉલમ (2.1 × 100 mm, 1.7 μm, વોટર્સ) નો ઉપયોગ કરીને મેટાબોલાઇટ્સને અલગ કરવામાં આવ્યા હતા.પોઝિટિવ આયન મોડમાં, મોબાઈલ તબક્કાઓ 95% (A) અને 50% એસેટોનાઈટ્રાઈલ (B) હતા, દરેકમાં 10 mmol/L એમોનિયમ એસિટેટ અને 0.1% ફોર્મિક એસિડ હોય છે.નેગેટિવ મોડમાં, મોબાઇલ તબક્કા A અને Bમાં અનુક્રમે 95% અને 50% એસિટોનાઇટ્રાઇલ હોય છે, બંને તબક્કામાં 10 mmol/L એમોનિયમ એસિટેટ, pH = 9 હોય છે. ગ્રેડિયન્ટ પ્રોગ્રામ નીચે મુજબ હતો: 0-0.5 મિનિટ, 2% B;0.5–12 મિનિટ, 2–50% B;12–14 મિનિટ, 50–98% B;14–16 મિનિટ, 98% B;16-16.1.મિનિટ, 98 –2% B;16.1–20 મિનિટ, 2% B. ઓટોસેમ્પલરમાં સ્તંભને 40°C અને નમૂનાને 10°C પર જાળવવામાં આવ્યો હતો.પ્રવાહ દર 0.3 મિલી/મિનિટ હતો, ઈન્જેક્શન વોલ્યુમ 3 μl હતું.ઇલેક્ટ્રોસ્પ્રે આયનાઇઝેશન (ESI) સ્ત્રોત સાથેનું ક્યુ-એક્ઝેક્ટિવ ઓર્બિટ્રેપ માસ સ્પેક્ટ્રોમીટર (થર્મો ફિશર સાયન્ટિફિક) સંપૂર્ણ સ્કેન મોડમાં ચલાવવામાં આવ્યું હતું અને મોટા પ્રમાણમાં ડેટા એકત્રિત કરવા માટે ddMS2 મોનિટરિંગ મોડ સાથે જોડાયેલું હતું.MS પરિમાણો નીચે પ્રમાણે સેટ કરવામાં આવ્યા હતા: સ્પ્રે વોલ્ટેજ +3.8 kV/- 3.2 kV, રુધિરકેશિકા તાપમાન 320°C, શિલ્ડિંગ ગેસ 40 આર્બ, સહાયક ગેસ 10 આર્બ, પ્રોબ હીટર તાપમાન 350°C, સ્કેનિંગ રેન્જ 70–1050 m/h, ઠરાવ70 000. એક્સકેલિબર 4.1 (થર્મો ફિશર સાયન્ટિફિક) નો ઉપયોગ કરીને ડેટા હસ્તગત કરવામાં આવ્યો હતો.
ડેટાની ગુણવત્તાનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે, દરેક નમૂનામાંથી સુપરનેટન્ટના 10 μL એલિકોટ્સને દૂર કરીને પૂલ્ડ ગુણવત્તા નિયંત્રણ (QC) નમૂનાઓ બનાવવામાં આવ્યા હતા.UPLC-MS સિસ્ટમની સ્થિરતાનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે વિશ્લેષણાત્મક ક્રમની શરૂઆતમાં છ ગુણવત્તા નિયંત્રણ નમૂનાના ઇન્જેક્શનનું વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું.ગુણવત્તા નિયંત્રણના નમૂનાઓ સમયાંતરે બેચમાં દાખલ કરવામાં આવે છે.આ અભ્યાસમાં સીરમ સેમ્પલના તમામ 11 બેચનું એલસી-એમએસ દ્વારા વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું.નિષ્કર્ષણ પ્રક્રિયાને મોનિટર કરવા અને બેચ-ટુ-બેચ અસરોને સમાયોજિત કરવા માટે 100 તંદુરસ્ત દાતાઓના સીરમ પૂલ મિશ્રણના અલિકોટ્સનો સંદર્ભ સામગ્રી તરીકે સંબંધિત બેચમાં ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો.સન યાટ-સેન યુનિવર્સિટીના મેટાબોલોમિક્સ સેન્ટર ખાતે શોધ સમૂહ, આંતરિક માન્યતા સમૂહ અને બાહ્ય માન્યતા સમૂહનું અલક્ષિત ચયાપચયશાસ્ત્ર વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું.ગુઆંગડોંગ યુનિવર્સિટી ઓફ ટેક્નોલોજી એનાલિસિસ એન્ડ ટેસ્ટિંગ સેન્ટરની બાહ્ય પ્રયોગશાળાએ પણ ક્લાસિફાયર મોડલની કામગીરી ચકાસવા માટે બાહ્ય સમૂહમાંથી 40 નમૂનાઓનું વિશ્લેષણ કર્યું હતું.
નિષ્કર્ષણ અને પુનર્ગઠન પછી, બહુવિધ પ્રતિક્રિયા મોનિટરિંગ (MRM) માં ઇલેક્ટ્રોસ્પ્રે આયનાઇઝેશન (ESI) સ્ત્રોત સાથે અલ્ટ્રા-હાઇ પર્ફોર્મન્સ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી-ટેન્ડમ માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રી (એજિલેન્ટ 6495 ટ્રિપલ ક્વાડ્રુપોલ) નો ઉપયોગ કરીને સીરમ મેટાબોલાઇટ્સનું સંપૂર્ણ પ્રમાણ માપવામાં આવ્યું હતું.એક ACQUITY BEH Amide કૉલમ (2.1 × 100 mm, 1.7 μm, વોટર્સ) નો ઉપયોગ મેટાબોલિટ્સને અલગ કરવા માટે કરવામાં આવ્યો હતો.મોબાઈલ તબક્કામાં 90% (A) અને 5% એસેટોનાઈટ્રાઈલ (B) 10 mmol/L એમોનિયમ એસીટેટ અને 0.1% એમોનિયા સોલ્યુશનનો સમાવેશ થાય છે.ગ્રેડિયન્ટ પ્રોગ્રામ નીચે મુજબ હતો: 0-1.5 મિનિટ, 0% B;1.5–6.5 મિનિટ, 0–15% B;6.5–8 મિનિટ, 15% B;8–8.5 મિનિટ, 15%–0% B;8.5–11.5 મિનિટ, 0%B.ઑટોસેમ્પલરમાં કૉલમ 40 °C અને નમૂના 10 °C પર જાળવવામાં આવ્યો હતો.પ્રવાહ દર 0.3 એમએલ/મિનિટ હતો અને ઈન્જેક્શન વોલ્યુમ 1 μL હતું.MS પરિમાણો નીચે પ્રમાણે સેટ કરવામાં આવ્યા હતા: કેશિલરી વોલ્ટેજ ±3.5 kV, નેબ્યુલાઇઝર પ્રેશર 35 psi, શીથ ગેસ ફ્લો 12 L/min, શીથ ગેસનું તાપમાન 350°C, ડ્રાયિંગ ગેસનું તાપમાન 250°C, અને ડ્રાયિંગ ગેસ ફ્લો 14 l/min.ટ્રિપ્ટોફન, પાયરુવેટ, લેક્ટેટ, હાયપોક્સેન્થાઈન અને ઝેન્થાઈનના MRM રૂપાંતરણ 205.0–187.9, 87.0–43.4, 89.0–43.3, 135.0–92.3 અને 151.0–107 હતા.અનુક્રમે 9.માસ હન્ટર B.07.00 (એજિલેન્ટ ટેક્નોલોજી) નો ઉપયોગ કરીને ડેટા એકત્રિત કરવામાં આવ્યો હતો.સીરમ નમૂનાઓ માટે, પ્રમાણભૂત મિશ્રણ ઉકેલોના માપાંકન વણાંકોનો ઉપયોગ કરીને ટ્રિપ્ટોફન, પાયરુવેટ, લેક્ટેટ, હાયપોક્સેન્થિન અને ઝેન્થિનનું પ્રમાણ નક્કી કરવામાં આવ્યું હતું.કોષના નમૂનાઓ માટે, ટ્રિપ્ટોફન સામગ્રીને આંતરિક ધોરણ અને સેલ પ્રોટીન માસમાં સામાન્ય કરવામાં આવી હતી.
કમ્પાઉન્ડ ડિસ્કવરી 3.1 અને ટ્રેસફાઇન્ડર 4.0 (થર્મો ફિશર સાયન્ટિફિક) નો ઉપયોગ કરીને પીક એક્સટ્રેક્શન (m/z અને રીટેન્શન ટાઇમ (RT)) કરવામાં આવ્યું હતું.બેચ વચ્ચેના સંભવિત તફાવતોને દૂર કરવા માટે, સંબંધિત વિપુલતા મેળવવા માટે પરીક્ષણ નમૂનાની દરેક લાક્ષણિકતા શિખરને સમાન બેચમાંથી સંદર્ભ સામગ્રીના લાક્ષણિક શિખર દ્વારા વિભાજિત કરવામાં આવી હતી.માનકીકરણ પહેલાં અને પછીના આંતરિક ધોરણોના સંબંધિત પ્રમાણભૂત વિચલનો પૂરક કોષ્ટક 6 માં દર્શાવવામાં આવ્યા છે. બે જૂથો વચ્ચેના તફાવતો ખોટા શોધ દર (FDR<0.05, વિલ્કોક્સન દ્વારા સહી કરેલ રેન્ક ટેસ્ટ) અને ફોલ્ડ ફેરફાર (>1.2 અથવા <0.83) દ્વારા દર્શાવવામાં આવ્યા હતા.એક્સટ્રેક્ટેડ ફીચર્સનો રો MS ડેટા અને સંદર્ભ સીરમ-કરેક્ટેડ MS ડેટા અનુક્રમે પૂરક ડેટા 1 અને પૂરક ડેટા 2 માં બતાવવામાં આવે છે.પીક એનોટેશન ઓળખના ચાર નિર્ધારિત સ્તરોના આધારે કરવામાં આવ્યું હતું, જેમાં ઓળખાયેલ ચયાપચય, અનુમાનિત રીતે નોંધાયેલા સંયોજનો, અનુમાનિત રીતે લાક્ષણિકતાવાળા સંયોજન વર્ગો અને અજાણ્યા સંયોજનો 22 નો સમાવેશ થાય છે.કમ્પાઉન્ડ ડિસ્કવરી 3.1 (mzCloud, HMDB, Chemspider) માં ડેટાબેઝ શોધના આધારે, MS/MS સાથે મેળ ખાતા જૈવિક સંયોજનો અથવા mzCloud (સ્કોર > 85) માં ચોક્કસ મેચ ટીકાઓ અથવા Chemspider ને અંતે વિભેદક મેટાબોલોમ વચ્ચે મધ્યવર્તી તરીકે પસંદ કરવામાં આવ્યા હતા.દરેક વિશેષતા માટે પીક એનોટેશન્સ પૂરક ડેટા 3 માં સમાવવામાં આવેલ છે. મેટાબોએનાલિસ્ટ 5.0 નો ઉપયોગ સરવાળો-સામાન્ય મેટાબોલાઇટ વિપુલતાના અવિચલિત વિશ્લેષણ માટે કરવામાં આવ્યો હતો.MetaboAnalyst 5.0 એ નોંધપાત્ર રીતે અલગ અલગ ચયાપચયના આધારે KEGG પાથવે સંવર્ધન વિશ્લેષણનું પણ મૂલ્યાંકન કર્યું.મુખ્ય ઘટક વિશ્લેષણ (PCA) અને આંશિક ઓછામાં ઓછા ચોરસ ભેદભાવ વિશ્લેષણ (PLS-DA) સ્ટેક નોર્મલાઇઝેશન અને ઓટોસ્કેલિંગ સાથે ropls સોફ્ટવેર પેકેજ (v.1.26.4) નો ઉપયોગ કરીને વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું.નોડ્યુલ મેલિગ્નન્સીની આગાહી કરવા માટેનું શ્રેષ્ઠ મેટાબોલાઇટ બાયોમાર્કર મોડલ ઓછામાં ઓછા સંપૂર્ણ સંકોચન અને પસંદગી ઓપરેટર (LASSO, R પેકેજ v.4.1-3) સાથે દ્વિસંગી લોજિસ્ટિક રીગ્રેશનનો ઉપયોગ કરીને બનાવવામાં આવ્યું હતું.શોધ અને માન્યતા સેટમાં ભેદભાવપૂર્ણ મોડેલનું પ્રદર્શન pROC પેકેજ (v.1.18.0.) અનુસાર ROC વિશ્લેષણના આધારે AUC ના અંદાજ દ્વારા દર્શાવવામાં આવ્યું હતું.શ્રેષ્ઠ સંભાવના કટઓફ મોડેલના મહત્તમ યુડેન ઇન્ડેક્સ (સંવેદનશીલતા + વિશિષ્ટતા - 1) ના આધારે મેળવવામાં આવી હતી.થ્રેશોલ્ડ કરતાં ઓછા અથવા વધુ મૂલ્યો સાથેના નમૂનાઓ અનુક્રમે સૌમ્ય નોડ્યુલ્સ અને ફેફસાના એડેનોકાર્સિનોમા તરીકે અનુમાન કરવામાં આવશે.
A549 કોષો (#CCL-185, અમેરિકન ટાઈપ કલ્ચર કલેક્શન) F-12K માધ્યમમાં ઉગાડવામાં આવ્યા હતા જેમાં 10% FBS છે.SLC7A5 ને લક્ષ્ય બનાવતા ટૂંકા હેરપિન RNA (shRNA) સિક્વન્સ અને નોન-ટાર્ગેટિંગ કંટ્રોલ (NC) લેન્ટીવાયરલ વેક્ટર pLKO.1-puro માં દાખલ કરવામાં આવ્યા હતા.shSLC7A5 ની એન્ટિસેન્સ સિક્વન્સ નીચે મુજબ છે: Sh1 (5′-GGAGAAAACCTGATGAACAGTT-3′), Sh2 (5′-GCCGTGGACTTCGGGAACTAT-3′).SLC7A5 (#5347) અને ટ્યુબ્યુલિન (#2148) માટે એન્ટિબોડીઝ સેલ સિગ્નલિંગ ટેકનોલોજીમાંથી ખરીદવામાં આવ્યા હતા.SLC7A5 અને ટ્યુબ્યુલિનના એન્ટિબોડીઝનો ઉપયોગ વેસ્ટર્ન બ્લોટ વિશ્લેષણ માટે 1:1000 ના મંદન પર કરવામાં આવ્યો હતો.
સીહોર્સ એક્સએફ ગ્લાયકોલિટીક સ્ટ્રેસ ટેસ્ટ એક્સ્ટ્રા સેલ્યુલર એસિડિફિકેશન (ECAR) સ્તરને માપે છે.પરીક્ષામાં, ECAR દ્વારા માપવામાં આવેલ સેલ્યુલર ગ્લાયકોલિટીક ક્ષમતાને ચકાસવા માટે ગ્લુકોઝ, ઓલિગોમાસીન A, અને 2-DG ક્રમિક રીતે સંચાલિત કરવામાં આવ્યા હતા.
નોન-ટાર્ગેટિંગ કંટ્રોલ (NC) અને shSLC7A5 (Sh1, Sh2) વડે ટ્રાન્સફેક્ટ થયેલા A549 કોષોને 10 સેમી વ્યાસની ડીશમાં રાતોરાત પ્લેટેડ કરવામાં આવ્યા હતા.કોષ ચયાપચયને 1 મિલી બરફ-ઠંડા 80% જલીય મિથેનોલ સાથે કાઢવામાં આવ્યા હતા.મિથેનોલ સોલ્યુશનમાંના કોષોને સ્ક્રેપ કરવામાં આવ્યા હતા, નવી ટ્યુબમાં એકત્રિત કરવામાં આવ્યા હતા અને 4°C પર 15 મિનિટ માટે 15,000 × g પર સેન્ટ્રીફ્યુજ કરવામાં આવ્યા હતા.800 µl સુપરનેટન્ટ એકત્રિત કરો અને હાઇ-સ્પીડ વેક્યુમ કોન્સેન્ટ્રેટરનો ઉપયોગ કરીને સૂકવો.સૂકા મેટાબોલાઇટ ગોળીઓનું પછી ઉપર વર્ણવ્યા પ્રમાણે LC-MS/MS નો ઉપયોગ કરીને ટ્રિપ્ટોફન સ્તરો માટે વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું.A549 કોષો (NC અને shSLC7A5) માં સેલ્યુલર NAD(H) સ્તરો ઉત્પાદકની સૂચનાઓ અનુસાર માત્રાત્મક NAD+/NADH કલરમેટ્રિક કિટ (#K337, બાયોવિઝન) નો ઉપયોગ કરીને માપવામાં આવ્યા હતા.ચયાપચયની માત્રાને સામાન્ય બનાવવા માટે દરેક નમૂના માટે પ્રોટીનનું સ્તર માપવામાં આવ્યું હતું.
નમૂનાનું કદ પ્રાથમિક રીતે નક્કી કરવા માટે કોઈ આંકડાકીય પદ્ધતિઓનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો ન હતો.બાયોમાર્કરની શોધ 15,18 ને ધ્યાનમાં રાખીને અગાઉના ચયાપચયના અભ્યાસોને કદ નિર્ધારણ માટે માપદંડ તરીકે ગણવામાં આવ્યા છે, અને આ અહેવાલોની તુલનામાં, અમારા નમૂના પૂરતા હતા.અભ્યાસ સમૂહમાંથી કોઈ નમૂનાને બાકાત રાખવામાં આવ્યા ન હતા.સીરમના નમૂનાઓ અવ્યવસ્થિત રીતે શોધ જૂથ (306 કેસ, 74.6%) અને આંતરિક માન્યતા જૂથ (104 કેસ, 25.4%) ને અલક્ષિત ચયાપચય અભ્યાસ માટે સોંપવામાં આવ્યા હતા.અમે લક્ષિત મેટાબોલિક્સ અભ્યાસ માટે શોધ સેટમાંથી દરેક જૂથમાંથી રેન્ડમલી 70 કેસો પણ પસંદ કર્યા છે.LC-MS ડેટા સંગ્રહ અને વિશ્લેષણ દરમિયાન તપાસકર્તાઓને જૂથ સોંપણી માટે આંધળા કરવામાં આવ્યા હતા.મેટાબોલિક્સ ડેટા અને સેલ પ્રયોગોના આંકડાકીય વિશ્લેષણ સંબંધિત પરિણામો, આકૃતિ દંતકથાઓ અને પદ્ધતિઓ વિભાગોમાં વર્ણવવામાં આવ્યા છે.સેલ્યુલર ટ્રિપ્ટોફન, એનએડીટી અને ગ્લાયકોલિટીક પ્રવૃત્તિનું પ્રમાણીકરણ સમાન પરિણામો સાથે ત્રણ વખત સ્વતંત્ર રીતે કરવામાં આવ્યું હતું.
અભ્યાસ ડિઝાઇન વિશે વધુ માહિતી માટે, આ લેખ સાથે સંકળાયેલ નેચરલ પોર્ટફોલિયો રિપોર્ટ એબ્સ્ટ્રેક્ટ જુઓ.
અર્કિત વિશેષતાઓનો કાચો MS ડેટા અને સંદર્ભ સીરમનો સામાન્યકૃત MS ડેટા અનુક્રમે પૂરક ડેટા 1 અને પૂરક ડેટા 2 માં દર્શાવવામાં આવ્યો છે.વિભેદક વિશેષતાઓ માટેની ટોચની ટીકાઓ પૂરક ડેટા 3 માં રજૂ કરવામાં આવી છે. LUAD TCGA ડેટાસેટ https://portal.gdc.cancer.gov/ પરથી ડાઉનલોડ કરી શકાય છે.ગ્રાફની રચના માટેનો ઇનપુટ ડેટા સ્રોત ડેટામાં પ્રદાન કરવામાં આવે છે.આ લેખ માટે સ્રોત ડેટા પ્રદાન કરવામાં આવ્યો છે.
નેશનલ લંગ સ્ક્રીનીંગ સ્ટડી ગ્રુપ, વગેરે. ઓછા ડોઝની ગણતરી કરેલ ટોમોગ્રાફી વડે ફેફસાના કેન્સરની મૃત્યુદરમાં ઘટાડો.ઉત્તરી ઈંગ્લેન્ડ.જે. મેડ.365, 395–409 (2011).
ક્રેમર, બીએસ, બર્ગ, કેડી, એબર્લે, ડીઆર અને પ્રોફેટ, પીસી લંગ કેન્સર સ્ક્રીનીંગ લો-ડોઝ હેલિકલ સીટીનો ઉપયોગ કરીને: નેશનલ લંગ સ્ક્રીનીંગ સ્ટડી (એનએલએસટી) ના પરિણામો.જે. મેડ.સ્ક્રીન 18, 109–111 (2011).
ડી કોનીંગ, એચજે, એટ અલ.રેન્ડમાઇઝ્ડ ટ્રાયલમાં વોલ્યુમેટ્રિક સીટી સ્ક્રીનીંગ સાથે ફેફસાના કેન્સરની મૃત્યુદરમાં ઘટાડો.ઉત્તરી ઈંગ્લેન્ડ.જે. મેડ.382, 503–513 (2020).